Qual é a diferença entre uma réplica biológica e uma réplica técnica?

Uma definição muito boa que ouvi recentemente seria:

Uma réplica técnica é um experimento realizado uma vez e medido várias vezes.

Uma réplica biológica é um experimento realizado (e, portanto, também medido) várias vezes.


Observe que um experimento é uma perturbação real do sistema biológico que você está. Portanto, se você executar várias transferências ocidentais do mesmo lisado, essa é uma réplica técnica.

O melhor exemplo é qPCR. Quero provar que meu gene favorito (MFG) é regulamentado com a idade. Então, eu preciso de réplicas biológicas para controlar a variação biológica. Mesmo que eu pegue todos os animais na mesma idade, eles obviamente variam, mas, em média, verei o nível de expressão. Dependendo da variação, você pode precisar de muitos animais, mas digamos que 3 seja suficiente. Quando eu configurar o qPCR, cada reação será feita em triplicado. Essas são réplicas técnicas para explicar a variação na minha capacidade de pipetar e configurar tudo da mesma forma. Portanto, três animais para variação biológica, 6 no total, se jovens e idosos, e um gene em triplicado para 18 reações no total. Na realidade, você também faria um ou mais genes de controle (actina, gapdh, etc.) também em triplicado.

Em biologia, é melhor pensar neles como controles que não se replicam. Você precisa considerar a variação executando os controles corretos nos números corretos. Grande parte dessa variação é natural; devido a moscas / ratos / vermes / células não serem idênticos. Muito também é introduzido por você, o cientista ou as máquinas que você usa. Não há problema em pensar um como biológico e outro como técnico, mas você estará melhor se tentar controlar o máximo possível de variações em seus experimentos, independentemente da fonte.

Uma réplica técnica é quando você testa a mesma amostra várias vezes - é usada para testar a variabilidade no próprio protocolo de teste.

Uma réplica biológica é onde você executa o mesmo teste em várias amostras do mesmo material / tipo de célula / tecido. As amostras são diferentes, mas espera-se que sejam muito semelhantes (se não idênticas) em relação ao teste. As réplicas biológicas são usadas para testar a variabilidade entre amostras que foram selecionadas com base em serem idênticas.

Por exemplo, se você fez uma preparação de RNA para uma amostra de célula e colocou parte dessa preparação em vários poços de uma placa de microtitulação, isso é uma réplica técnica. Se você coletou várias amostras das células e preparou um RNA para cada uma delas e as revestiu, essas são réplicas biológicas. O exame das réplicas técnicas permite quantificar a variação interna de um teste (por exemplo, TXP) e, enquanto o posterior permitiria ver variações no procedimento de preparação ou na coleta de amostras.